完成机构：[1]西北农林科技大学茶叶研究所,陕西杨凌712100 [2]安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室,安徽合肥230036 [3]南京农业大学茶叶科学研究所,江苏南京210095
为了在烟草中合成咖啡碱,将咖啡碱合成酶（Tea caffeine synthase,TCS）基因cDNA全序列克隆到双元载体pBI121中,通过农杆菌叶盘转化法将TCS基因成功转入烟草,结果得到72株转基因烟草植株。对其中3株转基因植株进行PCR检测和PCR-Southern检测,证实TCS基因已整合到基因组中;RT-PCR和Northern分析显示,TCS在这些植株中均能正常转录。用从转基因植株中提取的粗酶液进行体外酶促反应,能催化7-甲基黄嘌呤和可可碱向咖啡碱的转变,由此表明,转基因烟草植株中能产生具有正常生物学活性的TCS,但从3株转基因烟草中均未检测到咖啡碱。
